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西澳菲斯特農(nóng)場赤桉樹蜂蜜對血虛證模型小鼠的影響

作者:趙立波,陳家鈴,陶春霖來源:《中國食品》日期:2024-10-22人氣:51

再生障礙性貧血(Aplastic amemia,,AA),又稱血虛證,為中醫(yī)臨床常見候,是一種以造血功能衰竭為特征的疾病,其發(fā)病機(jī)制主要骨髓造血干細(xì)胞損傷、造血微環(huán)境損傷以及免疫性造血抑制等機(jī)制相關(guān)。目前,治療AA的主要藥物,如環(huán)孢素(cyclosporine A,CsA),存在使用后反應(yīng)率較低且復(fù)發(fā)率較高的缺點。

蜂蜜入藥在我國有悠久的歷史。蜂蜜用途廣泛、貨源充足、價格適中,對人體無毒副作用,在中藥及中成藥制劑生產(chǎn)中具有獨特的地位。菲斯特農(nóng)場赤桉蜂蜜(Fewster's Farm jarrah honey,F(xiàn)FJH)中含多種礦物質(zhì),且種類含量與人體血液中的數(shù)值十分相近,易被人體吸收利用。同時其還含有多種人體細(xì)胞、組織和器官所需的營養(yǎng)成分。本研究以西澳菲斯特農(nóng)場赤桉蜂蜜為研究對象,通過建立小鼠血虛模型,探究服用不同劑量TA10+FFJH以及TA30+FFJH對小鼠血虛癥狀的影響。

一、實驗材料

1.實驗藥品與試劑西澳菲斯特農(nóng)場赤桉蜂蜜(Fewster's Farm jarrah honey,F(xiàn)FJH),洋妝源(上海)網(wǎng)絡(luò)科技有限公司;乙酰苯肼、淋巴細(xì)胞分離液(美國SIGMA公司);環(huán)磷酰胺,(上海華聯(lián)制藥有限公司);促紅細(xì)胞生成素(EPO)ELASA試劑盒(美國R&D Systems公司);其他試劑均為國產(chǎn)分析純或生化試劑。

2.實驗動物。選擇BALB/c小鼠80只,購于北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司。雌雄各半,年齡為8~12周,體重控制在18g~22g。飼養(yǎng)溫度為23℃±1℃,濕度控制在40%~60%,24h光暗循環(huán),通風(fēng)良好,飼養(yǎng)期間保證小鼠自由飲水飲食。

二、試驗方法

1.模型建立。模型的建立以及檢測參考文獻(xiàn)的方法,按乙酰苯肼、X 射線、環(huán)磷酰胺聯(lián)合應(yīng)用的方法建立再生障礙性貧血小鼠模型,試驗周期為45 d45d后頸椎脫臼處死小鼠,采樣進(jìn)行檢測。

實驗分組:選取BALB/c小鼠80只,在適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,將其分為以下8組:①正常對照組;②血虛模型組;③25%-TA10+FFJH組;④50%-TA10+FFJH組;⑤75%-TA10+FFJH組;⑥25%-TA10+FFJH組;⑦50%-TA10+FFJH組;⑧75%-TA10+FFJH組;每組小鼠10只。

實驗流程:聯(lián)合乙酰苯肼、X 射線、環(huán)磷酰胺建立再生障礙性貧血小鼠模型。將不同劑量蜂蜜溶解至等量生理鹽水中,從第7d開始,以每天一次的頻率按各組劑量對小鼠進(jìn)行灌胃,同時空白對照組以及血虛模型組小鼠灌胃等體積生理鹽水,實驗周期45d,45d后頸椎脫臼處死小鼠,采樣進(jìn)行檢測。

2.各組小鼠一般行為學(xué)觀察經(jīng)上述步驟處理45d后,對小鼠運動靈活度、反應(yīng)敏捷度、毛發(fā)光澤度、脫毛情況及體重變化情況進(jìn)行觀察統(tǒng)計。

3.外周血檢測

1細(xì)胞計數(shù)。各實驗組第45d,對各組小鼠進(jìn)行稱重,經(jīng)眼眶取血,測定外周血血紅蛋白含量、紅細(xì)胞、白細(xì)胞及血小板數(shù);在顯微鏡下觀察外周血涂片,并進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

2EPO濃度測定。EPO是一種重要的造血調(diào)控因子,血液中EPO水平能反映機(jī)體生成紅細(xì)胞的能力。參考文獻(xiàn)的方法,對血液進(jìn)行樣品處理,使用試劑盒對血液中EPO含量進(jìn)行測定,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得出樣本EPO濃度(pg/mL)。

4.骨髓有核細(xì)胞(BMCs)計數(shù)實驗參考陳姍姍等的方法,頸椎脫臼處死小鼠, 取右側(cè)股骨,用PBS緩沖液反復(fù)沖洗,取骨髓細(xì)胞懸液,配平至相同體積,取0.2mL細(xì)胞懸液裂解紅細(xì)胞后,自動細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù)BMCs數(shù)量。

5.統(tǒng)計學(xué)分析。實驗數(shù)據(jù)至少重復(fù)3次,結(jié)果以Means±SEM表示。采用Origin8.5和SPSS分析軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析,統(tǒng)計結(jié)果P0.05認(rèn)為有顯著性差異。

三、結(jié)果與分析

1.血虛模型小鼠一般行為學(xué)觀察。與正常對照組相比,血虛模型組小鼠陸續(xù)出現(xiàn)皮毛蓬亂、光澤度降低,以及部分脫毛現(xiàn)象,且隨實驗進(jìn)程的發(fā)展,癥狀逐漸加重。同時小鼠出現(xiàn)精神不佳、活動減少、體重下降的癥狀。

對比服用各FFJH劑量組與血虛模型組發(fā)現(xiàn),服用FFJH組小鼠皮毛光澤度下降脫毛程度均有減輕,同時精神狀態(tài)有明顯提升。各組小鼠的體重平均值如圖1所示,通過對比可以看出,灌胃FFJH各組小鼠的平均體重均高于血虛模型組,且呈劑量對應(yīng)關(guān)系,說明FFJH對血虛引起的小鼠體重下降有抑制作用。同時,通過在同劑量添加下體重值對比可以觀察到,TA30+FFJH較TA10+FFJH效果更佳。


注:與空白組比,#代表與空白對照組相比差異顯著,P0.05表示與模型組相比差異顯著。

2.FFJH對血虛模型小鼠外周血三系水平影響。1為不同F(xiàn)FJH劑量組、空白對照組以及血虛模型組外周血中血紅蛋白(Hb)、紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)以及血小板(PLT)水平情況。由表1可以看出,血虛模型條件下,小鼠血常規(guī)中的各項指標(biāo)均顯著降低(P0.01),即血虛模型組小鼠血象三系水平明顯下降。服用各FFJH劑量組與血虛模型組比,小鼠外周血三系水平均有所提升,且呈劑量對應(yīng)關(guān)系,實驗結(jié)果說明, FFJH對小鼠再生障礙性貧血有顯著改善效果(P0.01)。

1 FFHJ對小鼠外周血的影響

組別

數(shù)量(只)

Hb(g/L)

RBC(×1012/L)

WBC(×109/L)

PLT(×109/L)

空白對照組

10

158.65±13.43

10.02±1.32

9.94±2.11*

860.21±30.12*

血虛模型組

10

76.18±14.53##

4.12±1.43##

2.23±0.98##

359.23±15.21##

25%TA10+

FFJH組

10

120.12±12.23**

6.23±2.12

2.43±0.12

560.12±52.58**

50%TA10+

FFJH組

10

128.33±5.12**

7.24±1.32*

3.54±0.87

771.60±31.69**

75%TA10+

FFJH組

10

156.20±15.22**

9.52±1.43**

7.13±2.11**

831.38±73.15**

25%TA30+

FFJH組

10

136.20±5.24**

6.52±1.44

3.13±1.13

631.38±23.15**

50%TA30+

FFJH組

10

141.32±25.02**

8.77±1.81**

4.21±1.24

782.02±13.16**

75%TA30+

FFJH組

10

162.27±5.24**

9.01±1.44**

8.13±1.13**

891.38±18.15**

注:與空白組比較,##代表與空白對照組相比差異極顯著,P0.01; *表示與模型組相比差異顯著,P0.05,**表示與模型組相比差異極顯著,P0.01。

3.FFJH對血虛模型小鼠EPO濃度測定

研究表明,EPO具有抗凋亡以及促進(jìn)血管生成的作用,其濃度水平能直觀反映骨髓紅系造血功能障礙程度,如圖2為不同F(xiàn)FJH劑量組、空白對照組以及血虛模型組EPO濃度測定結(jié)果。血虛模型條件下,小鼠血清中的EPO濃度顯著提高(P0.01)。而各FFJH劑量組與血虛模型組EPO含量均顯著降低,并呈劑量對應(yīng)關(guān)系(P0.01)。實驗結(jié)果說明,FFJH對再生障礙性貧血小鼠外周血各種血細(xì)胞形成有促進(jìn)作用;且通過組間數(shù)據(jù)對比發(fā)現(xiàn),同劑量添加條件下TA30+FFJH組較TA10+FFJH組EPO濃度下降更明顯,這說明TA30+FFJH較TA10+FFJH降低EPO濃度作用更好。

注:與空白組比較,##代表與空白對照組相比差異極顯著,P0.01;**表示與模型組相比差異極顯著,P0.01。

4.FFJH對小鼠BMCs水平的影響。如圖3為不同F(xiàn)FJH劑量組、空白對照組以及血虛模型組BMCs水平。與空白組相比,模型組小鼠的造血干細(xì)胞數(shù)量顯著下降(P0.01)。同時各FFJH劑量組BMCs水平明顯高于血虛模型組,并呈劑量對應(yīng)關(guān)系(P0.05),推測 FFJH有促進(jìn)造血干細(xì)胞增殖的效果,可以抑制再生障礙性貧血小鼠有核細(xì)胞減少,進(jìn)而對骨髓的造血機(jī)能產(chǎn)生明顯的促進(jìn)作用。通過組間數(shù)據(jù)對比可以發(fā)現(xiàn),同劑量添加條件下TA30+FFJH組較TA10+FFJH組促進(jìn)造血干細(xì)胞增殖的效果更明顯,這說明TA30+FFJH較TA10+FFJH促進(jìn)造血干細(xì)胞增殖作用更好。

注:與空白組比,##代表與空白對照組相比差異極顯著,P0.01;**表示與模型組相比差異極顯著,P0.01。

四、結(jié)論

綜上所述,本實驗建立小鼠血虛模型,觀察各組小鼠體重變化、外周血常規(guī)、EPO濃度以及骨髓單個核細(xì)胞數(shù)的差異,發(fā)現(xiàn)FFJH可以改善血虛模型小鼠再生障礙性貧血導(dǎo)致的精神不佳、毛發(fā)光澤受損、體重下降的癥狀。服用FFJH后,模型小鼠血象三系水平以及骨髓細(xì)胞水平下降速度明顯減緩(P0.01),且EPO水平波動明顯減小,并呈劑量對應(yīng)關(guān)系(P0.01),說明FFJH能有效緩解修復(fù)血虛模型處理小鼠骨髓造血微環(huán)境受損。本研究也存在一定不足之處,實驗雖然證明了FFJH可以機(jī)體補(bǔ)充相關(guān)營養(yǎng)素以減輕小鼠血虛癥狀,但未對調(diào)節(jié)血虛癥癥狀的具體機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步研究。


文章來源:  《中國食品》   http://m.00559.cn/w/qt/29400.html

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