HPLC法測定鹽酸丙卡特羅口服溶液含量研究

  鹽酸丙卡特羅是一種高效β2受體激動劑，可快速舒張支氣管（起效迅速、作用持久），具有顯著的平喘效果，臨床用于治療哮喘等呼吸道疾病，療效確切。常用于治療小兒肺炎等呼吸系統(tǒng)疾病，常與鹽酸氨溴索等藥物聯(lián)用。目前，鹽酸丙卡特羅口服溶液的法定含量測定標(biāo)準(zhǔn)僅見于“國家食品 藥品監(jiān)督管理總 局標(biāo)準(zhǔn)YBH06672005”，該方法及文獻(xiàn)報(bào)道的HPLC法均需使用乙醚和/或氯仿多次萃取樣品，并采用內(nèi)標(biāo)法計(jì)算含量。雖然這些方法可行，但操作繁瑣復(fù)雜，易引入誤差。本研究通過優(yōu)化色譜條件，建立了更簡便的測定方法：樣品僅需稀釋過濾即可進(jìn)樣分析，采用外標(biāo)法定量。新方法不僅大幅簡化了操作流程，提高了工作效率，還避免了有毒有機(jī)溶劑的使用，降低了實(shí)驗(yàn)人員的健康風(fēng)險(xiǎn)，為鹽酸丙卡特羅口服溶液的質(zhì)量控制提供了更優(yōu)的檢測方案。
　　一、儀器與試藥
　　采用Agilent1220高效液相色譜儀（配紫外檢測器）。鹽酸丙卡特羅對照品購自中檢院；口服溶液為自制（60ml:0.3mg，批號20230501）。乙腈（色譜純，Tedia）、辛烷磺酸鈉（離子對色譜純，天津光復(fù)）、三乙胺（分析純，南京化學(xué)試劑）均為市售。
 　 二、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
　?。ㄒ唬┥V條件
　　色譜條件：C18色譜柱（4.6×250mm，5μm），流動相A為0.87g/L辛烷磺酸鈉（pH6.5）-乙腈（74:26），B為乙腈；梯度程序：0-15min100%A，16-20 min 50%A，21 min恢復(fù)100%A。檢測波長254 nm，柱溫35℃，流速1.0mL/min，進(jìn)樣量20μL。
　　（二）溶液的制備
　　供試品制備：精密量取樣品10mL，用10%甲醇稀釋至50 mL，濾過后取續(xù)濾液備用?？瞻纵o料按同法處理。對照品溶液：精密稱取對照品，以10%甲醇溶解并定容至5μg/mL，濾過即得。
 　 （三）專屬性實(shí)驗(yàn)
　　按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，精密量取供試品溶液、空白輔料溶液和對照品溶液各20μl，依法測定。結(jié)果顯示，丙卡特羅出峰時間約為7.2min，空白輔料溶液無干擾峰，表明輔料對主成分測定無影響，且丙卡特羅峰與輔料峰分離效果良好（分離度〉1.5），方法專屬性符合要求。
　　（四）線性與范圍試驗(yàn)
　　精密配制鹽酸丙卡特羅系列濃度溶液（0.004、0.2、0.8、1.0、1.2μg/mL），經(jīng)HPLC測定后建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示，在0.004-1.238μg/mL范圍內(nèi)，峰面積（Y）與濃度（X）呈良好線性關(guān)系，回歸方程為Y=70.931X-0.1176（R2=0.9996，n=5），線性范圍符合檢測要求。
　　（五）重復(fù)性試驗(yàn)
　　平行測定6份同批次樣品，測得含量平均值為99.88%，RSD為1.02%，表明方法重復(fù)性良好。
　?。┲噩F(xiàn)性試驗(yàn)
　　由不同人員、在不同日期和實(shí)驗(yàn)室測定同批次樣品6次，結(jié)果平均值為100.88%，RSD為0.12%，重現(xiàn)性符合要求。
　　（七）定量限
　　以信噪比S/N≈10計(jì)算，定量限為0.041ng（相當(dāng)于供試品溶液濃度的0.004%），靈敏度滿足檢測需求。
 　 （八）回收率試驗(yàn)
　　按低、中、高濃度（0.91、1.14、1.37μg）各3份測定，結(jié)果如下

　  三、討論
　　（一）色譜條件的選擇
　　當(dāng)前，《英國藥典》《美國藥典》《歐洲藥典》等均未收載鹽酸丙卡特羅口服溶液，僅《中國藥典》2020年版收載了原料藥、膠囊劑和片劑，《日本藥典》第15版收載了原料藥。這些藥典方法（《中國藥典》采用C18柱，磷酸鹽緩沖液-甲醇為流動相；《日本藥典》采用C18柱，戊烷磺酸鈉-甲醇為流動相）均未考慮口服溶液中矯味劑、防腐劑等輔料對主峰的干擾。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，這些輔料會嚴(yán)重影響丙卡特羅的測定。因此，現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)方法（如YBH06672005）和文獻(xiàn)方法均需先用氯仿/乙醚萃取去除輔料，再行HPLC分析，操作繁瑣且易產(chǎn)生誤差。本研究基于《日本藥典》方法進(jìn)行優(yōu)化，建立了新的HPLC檢測方法：采用改良的色譜條件，樣品僅需稀釋過濾即可直接進(jìn)樣，無需有機(jī)溶劑萃取。新方法不僅簡化了操作流程，提高了檢測效率，還避免了有毒試劑的使用，更具實(shí)用性和安全性。
　　（二）流動相的優(yōu)化
　　本研究初期參照《中國藥典》2020年版方法，發(fā)現(xiàn)存在主成分與輔料色譜峰共洗脫問題，調(diào)整流動相配比未能改善分離效果。隨后嘗試《日本藥典》15版方法，分離度雖有提升但仍未達(dá)標(biāo)。經(jīng)系統(tǒng)篩選不同離子對試劑（包括己烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉及辛烷磺酸鈉等），最終確定0.87g/L辛烷磺酸鈉體系能實(shí)現(xiàn)主峰與輔料的有效分離，且保留時間適中。后續(xù)優(yōu)化中，將甲醇改為乙腈顯著改善了峰形，通過調(diào)節(jié)pH至6.5并升高柱溫至35℃，進(jìn)一步提升了色譜分離性能，最終建立了滿足分析要求的色譜條件。
　　四、結(jié)論
　　本研究成功建立了一種簡便、高效且環(huán)保的HPLC法，用于測定鹽酸丙卡特羅口服溶液的含量。通過優(yōu)化色譜條件，采用辛烷磺酸鈉-乙腈梯度洗脫系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了主成分與輔料的有效分離，避免了傳統(tǒng)方法中有毒溶劑的使用，顯著提升了檢測效率和安全性。方法學(xué)驗(yàn)證表明，該方法線性關(guān)系良好（R2=0.9996）、靈敏度高（定量限0.041ng）、回收率穩(wěn)定（101.66%），且重現(xiàn)性優(yōu)異（RSD≤1.02%），為鹽酸丙卡特羅口服溶液的質(zhì)量控制提供了可靠的技術(shù)支持。未來研究可進(jìn)一步探索該方法在其他復(fù)方制劑或不同劑型中的適用性，并嘗試結(jié)合自動化前處理技術(shù)以進(jìn)一步提升檢測通量。此外，基于綠色化學(xué)理念，開發(fā)更低毒性的替代流動相或新型檢測技術(shù)（如UPLC-MS）也是值得關(guān)注的方向，以期在保證準(zhǔn)確性的同時，進(jìn)一步減少對環(huán)境及實(shí)驗(yàn)人員的影響，推動藥品質(zhì)量控制技術(shù)的可持續(xù)發(fā)展。

文章來源：  《安徽科技報(bào)》   http://m.00559.cn/w/qt/35317.html