絞股藍(lán)皂苷對大鼠抗氧化及免疫功能的影響

絞股藍(lán)又被稱為七葉參、甘茶曼，含有大量的絞股藍(lán)皂苷、氨基酸、蛋白質(zhì)、黃酮類、糖類、維生素等，其中的絞股藍(lán)皂苷是其藥效的主要組成部分，使得絞股藍(lán)具有很好的抗氧化和衰老，增強(qiáng)機(jī)體免疫能力，抵抗腫瘤、心血管缺氧缺血及腦組織缺氧，保護(hù)腎臟、肝臟等之效，進(jìn)而使得其成為一種有效的抗衰老、增強(qiáng)免疫、抗腫瘤的天然中藥材。再加上，當(dāng)前生物學(xué)、醫(yī)藥學(xué)、免疫學(xué)等眾多學(xué)科的快速發(fā)展，使得通過天然中藥材來實(shí)現(xiàn)抗衰老和增強(qiáng)免疫能力成為可能，本文就是在此背景下對絞股藍(lán)皂苷進(jìn)行詳細(xì)的探索，著重探索其在抗氧化、降低衰老，增強(qiáng)免疫能力方面的效果，并進(jìn)行如下詳細(xì)的報(bào)告：

1 資料與方法

1.1 一般資料

50只Wistar大鼠為研究樣本。將大鼠飼養(yǎng)兩周后平均分成五組，并分別命名為A、B、C、D、E組。

1.2 試驗(yàn)方法

在各組大鼠自由飲食和飲水的基礎(chǔ)上，A、B、C、D四組大鼠于頸背皮下每只每天一次按照125mg/kg劑量注射0.1ml的D-半乳糖；A、B、C三組大鼠每只每天一次按照180mg/kg、120mg/kg、60mg/kg劑量灌胃絞股藍(lán)總皂苷水2ml；D組大鼠每只每天一次按照2ml劑量的生理鹽水進(jìn)行灌胃；E組大鼠每只每天于頸背皮下分別按照0.1ml、2ml劑量進(jìn)行注射和灌胃生理鹽水；在實(shí)驗(yàn)的第三十天，進(jìn)行眼球取血，剖檢取心臟、腦組織并快速勻漿，制成組織勻漿液，用于各項(xiàng)指標(biāo)的檢測。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物和試劑

絞股藍(lán)皂苷（98%）；肝素鈉、細(xì)胞培養(yǎng)液和四甲基偶氮唑鹽；大鼠淋巴細(xì)胞分層液；姬姆薩-瑞士染色液；小牛血清；超氧化物歧化酶、谷朧甘膚過氧化物酶、丙二醛、過氧化氫酶、總抗氧化能力、一氧化氮試劑盒。

1.4 檢測指標(biāo)及方法

1.4.1 大鼠抗氧化檢測指標(biāo)

采用DTNB顯色法、黃嘌呤氧化酶法、可見光法、硫代巴比妥酸法、硝酸還原酶法和菲林絡(luò)合法測定大鼠谷朧甘膚過氧化物酶、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、丙二醛、一氧化氮和總抗氧化能力等抗氧化指標(biāo)的檢測。

1.4.2 大鼠免疫功能影響指標(biāo)

大鼠免疫器官指數(shù)、白細(xì)胞數(shù)量、吞噬細(xì)胞功能和外周血液T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率來測定其免疫功能效果

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料用t檢驗(yàn)，組間資料用檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 絞股藍(lán)皂苷對大鼠抗氧化功能的影響結(jié)果

2.1.1 大鼠血清和組織谷朧甘膚過氧化物酶活力結(jié)果：根據(jù)記錄的結(jié)果分析可以看出，D組比A、B、C、E組血清和組織中的谷朧甘膚過氧化物酶活性增強(qiáng)的更為顯著，且B組的活力提高程度最大，與E組接近，詳見表一。

表1 絞股藍(lán)皂苷對各組大鼠谷朧甘膚過氧化物酶影響結(jié)果

項(xiàng)目	E組	A組	B組	C組	D組
血清	449.6±9.4b	429.3±5.4b	431.3±7.6b	423.3±9.9b	379.8±10.6
腦	76.9±4.8b	69.5±3.8b	74.7±2.1b	69.9±3.6b	58.9±3.4
組織	267.6±9.4b	250.6±10.4b	255.6±12.4b	244.3±7.3b	209.3±5.3b

注：B代表各組對比差異顯著，b代表差異極其顯著，以下各表相同。

2.1.2 大鼠血清和組織超氧化物歧化酶活力結(jié)果：與E組相比較來說，A、B組血清和組織中的超氧化物歧化酶活力明顯增強(qiáng)，C組增強(qiáng)程度最低，D組與其相差不大，詳見表二。

 

表2 絞股藍(lán)皂苷對各組大鼠超氧化物歧化酶活力影響結(jié)果

項(xiàng)目	E組	A組	B組	C組	D組
血清	120.6±4.4b	114.3±6.4B	118.3±4.6b	113.3±9.9B	106.8±6.6
腦	169.9±8.8b	165.5±8.8B	168.7±12.1b	159.9±11.6	151.9±6.4
組織	234.6±4.4b	235.6±7.4b	240.1±6.4b	237.3±10.9b	216.3±5.3

2.1.3 大鼠血清和組織過氧化氫酶活力結(jié)果：較之于E組，A、D組過氧化氫酶活力極其明顯增強(qiáng)，C組差異明顯增強(qiáng)，B組不明顯，詳見表三。

表3 絞股藍(lán)皂苷對各組大鼠過氧化氫酶活力影響結(jié)果

項(xiàng)目	E組	A組	B組	C組	D組
血清	14.6±1.4b	12.0±1.4b	13.3±1.6b	11.3±1.3B	8.8±1.6
腦	14.9±0.8b	13.2±1.8b	14.7±0.9b	12.2±1.6B	9.5±1.4
組織	11.6±1.4b	10.6±0.9b	11.1±1.4b	10.3±1.2B	7.9±1.3

2.1.4 大鼠血清和組織丙二醛測定結(jié)果：較之于E組，B組丙二醛顯著增強(qiáng)，存在極其差距的差異，A組顯著差異，C、D組不明顯，詳見表四。

表4 絞股藍(lán)皂苷對各組大鼠丙二醛含量影響結(jié)果

項(xiàng)目	E組	A組	B組	C組	D組
血清	3.6±0.4B	3.8±0.6B	3.3±0.6b	3.5±0.6B	4.4±0.6
腦	7.9±0.6b	9.2±0.8	8.2±0.9b	8.4±0.4B	10.1±0.4
組織	8.6±1.0b	9.1±0.9B	8.6±1.4b	9.3±1.2	10.8±0.3

2.1.5 大鼠血清和組織一氧化氮測定結(jié)果：較之于E組，B組一氧化氮顯著降低，差異極其明顯，且與D組相當(dāng)，C組不明顯，詳見表五。

表5 絞股藍(lán)皂苷對各組大鼠一氧化氮含量影響結(jié)果

項(xiàng)目	E組	A組	B組	C組	D組
血清	10.3±0.4b	11.5±0.6B	10.6±0.6b	11.7±0.3B	13.4±0.6
腦	4.2±0.2B	4.8±0.6	4.3±0.3B	4.7±0.6	5.4±0.6
組織	1.6±0.4B	1.4±0.7B	1.1±0.5b	1.5±0.6	2.4±0.3

2.1.6 大鼠血清和組織總抗氧化能力結(jié)果：較之于E組，B組總抗氧化能力顯著增強(qiáng)，差異極其顯著，D組差異極顯著，C組心臟和A組腦組織中無顯著差異，詳見表六。

表6 絞股藍(lán)皂苷對各組大鼠總抗氧化能力影響結(jié)果

項(xiàng)目	E組	A組	B組	C組	D組
血清	8.3±0.2B	8.2±0.2B	8.9±0.5b	8.2±0.2B	7.4±0.4
腦	2.8±0.2b	2.2±0.1	3.3±0.1b	3.1±0.1b	2.4±0.2
組織	4.4±0.3B	4.4±0.2b	4.5±0.3b	4.1±0.3	3.8±0.3

2.2 絞股藍(lán)皂苷對大鼠免疫功能的影響結(jié)果

絞股藍(lán)皂苷對大鼠免疫功能各指標(biāo)影響結(jié)果分析:與E組相比，A、B、D組的胸腺、脾臟指數(shù)明顯提高，A、B、D組的白細(xì)胞數(shù)量明顯增加，具有極顯著差異，C組無顯著差異；A、B組吞噬細(xì)胞吞噬率明顯增加，差異極顯著，C、D組有顯著差異；B組外周T血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率明顯提高，差異極顯著，A、D組有顯著差異，C組無明顯差異，詳見表七。

表7 絞股藍(lán)皂苷對各組大鼠免疫功能各指標(biāo)影響結(jié)果

項(xiàng)目	E組	A組	B組	C組	D組
胸腺	2.2±0.2b	2.3±0.4b	2.3±0.1b	2.1±0.1	2.0±0.1
脾臟	3.5±0.2B	3.4±0.1B	3.4±0.1b	3.2±0.1	3.1±0.1
白細(xì)胞	10.9±0.6B	10.8±0.5B	11.6±0.9b	10.1±0.8	9.5±0.9
吞噬率	46.3±3.6B	47.1±3.0b	47.3±3.5b	46.1±2.8B	41.5±1.4
刺激指數(shù)	1.3±0.1B	1.2±0.1B	1.3±0.2b	1.1±0.2	1.0±0.1

3 討論

3.1 絞股藍(lán)皂苷對大鼠抗氧化功能討論

在絞股藍(lán)皂苷對大鼠抗氧化功能的影響方面采用了D-半乳糖誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生亞急性衰老反應(yīng)構(gòu)建大鼠衰老模型來具體研究其在抗衰老方面的表現(xiàn)。自由基是機(jī)體代謝過程中產(chǎn)生的內(nèi)源性物質(zhì)，正常情況下發(fā)揮著滅菌、調(diào)節(jié)免疫等作用，機(jī)體發(fā)生病變時(shí)，自由基含量會(huì)顯著增加，產(chǎn)生超氧化反應(yīng)，改變機(jī)體細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致免疫力下降、腫瘤和炎癥等發(fā)生，而動(dòng)物體內(nèi)包含著氧化物歧化酶、谷朧甘膚過氧化物酶、過氧化氫酶等可以有效清除自由基的抗氧化酶系統(tǒng)，而丙二醛作為自由基脂質(zhì)氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，可以很好的反應(yīng)機(jī)體脂質(zhì)過氧化作用和細(xì)胞功能受損程度，具體來說：

（1）谷朧甘膚過氧化物酶是機(jī)體普遍存在的催進(jìn)過氧化氫分解的重要的酶類，并使有害的過氧化物還原為無害的羥基化合物來保護(hù)機(jī)體生物膜不受過氧化損害，起到抗氧化作用。而絞股藍(lán)皂苷可以通過提高機(jī)體細(xì)胞免疫功能，抑制脂質(zhì)過氧化物的生成，來提高其谷朧甘膚過氧化物酶活力，進(jìn)而提高機(jī)體抗氧化能力。

（2）超氧化物歧化酶作為機(jī)體重要的抗氧化酶之一，主要通過對超氧化物陰離子自由基轉(zhuǎn)變?yōu)檫^氧化氫和氧離子反應(yīng)的促進(jìn)作用來減少機(jī)體脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護(hù)機(jī)體細(xì)胞和組織免受損害，同時(shí)，其清除自由基能力會(huì)隨著年齡的增長而降低，也是它成為衰老的一個(gè)主要標(biāo)志。醫(yī)學(xué)界大量文獻(xiàn)和實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明絞股藍(lán)皂苷能有效的增強(qiáng)衰老大鼠血清和心肌超氧化物歧化酶活力，并改善缺血心肌的收縮性能，縮小梗死面積，增強(qiáng)心肌和組織內(nèi)超氧化物歧化酶活力。

（3）正常代謝情況下，機(jī)體會(huì)產(chǎn)生少量的含氧自由基不僅不會(huì)對機(jī)體產(chǎn)生傷害，還能起到殺菌和調(diào)節(jié)免疫作用，并通過體內(nèi)的抗氧化酶和抗氧化劑清除出體外，只有機(jī)體病變，體內(nèi)抗氧化酶活性下降時(shí)，過多的氧自由基不能及時(shí)被清除并排出體外，這才導(dǎo)致其與機(jī)體生物大分子發(fā)生反應(yīng)，并生成大量過氧化物，進(jìn)而造成體積細(xì)胞和組織運(yùn)行的障礙。過氧化氫酶可以將其有效的直接分解，并降低其濃度，進(jìn)而保護(hù)機(jī)體細(xì)胞的穩(wěn)定和正常運(yùn)行。而不同劑量的絞股藍(lán)皂苷可以對過氧化氫酶活性的增強(qiáng)起到不同程度的作用，進(jìn)而幫助其發(fā)揮作用。

（4）機(jī)體的氧自由基可以攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸來引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，生成脂質(zhì)過氧化物，這種過氧化反應(yīng)和脂質(zhì)過氧化物會(huì)引起機(jī)體細(xì)胞的損害。丙二醛作為機(jī)體內(nèi)氧自由基代謝中的脂質(zhì)氧化物，可以有效的反應(yīng)機(jī)體脂質(zhì)過氧化自由基的發(fā)生與否和發(fā)生及損害程度如何。而絞股藍(lán)皂苷可以有效地抑制機(jī)體丙二醛的生成，降低其含量和濃度，提高機(jī)體對抗自由基氧化反應(yīng)引起的組織和細(xì)胞損害，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體清除自由基、抗氧化能力。

（5）當(dāng)一氧化氮濃度和含量很低時(shí)，不僅可以依靠自身的毒性起到殺菌作用，還可以通過吞噬細(xì)胞的激活實(shí)現(xiàn)有害物質(zhì)的清除，更能與機(jī)體其它分子配合作用使病毒細(xì)胞無法生長；當(dāng)含量過高時(shí)，會(huì)加劇免疫病理過程，損害組織，誘發(fā)基因突變和腫瘤等產(chǎn)生；當(dāng)濃度很高時(shí)，會(huì)增加機(jī)體自由基，加重氧化應(yīng)激反應(yīng)。絞股藍(lán)皂苷可以有效地抑制機(jī)體一氧化氮的升高，減少其釋放，并很好的抑制誘生型一氧化氮合成酶，提高機(jī)體抗衰老能力。

（6）機(jī)體總抗氧化能力的強(qiáng)弱與其健康程度密切相關(guān)，通過抗氧化體系可以有效地清除自由基和活性氧，避免機(jī)體發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，還可以通過過氧化物的分解，切斷氧化反應(yīng)鏈條，有著重要的意義。。

3.2 絞股藍(lán)皂苷對大鼠免疫功能影響的討論

機(jī)體大部分免疫細(xì)胞多分布于胸腺和脾臟內(nèi)，使得胸腺和脾臟成為機(jī)體重要的免疫器官。通過胸腺和脾臟重量指數(shù)的測量可以在很大程度上反應(yīng)機(jī)體免疫器官內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量，幫助了解和掌握機(jī)體免疫能力。絞股藍(lán)皂苷能增加大鼠的脾臟、胸腺重量明顯增加，這表明絞股藍(lán)皂苷能有效的提高機(jī)體免疫指數(shù)。

  （2）白細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分可以有效的抵抗外來病原體的侵入，對侵入機(jī)體的病原體起到吞噬和破壞作用，進(jìn)而參與到機(jī)體非特異性免疫的過程，并起到重大作用。一般來說，當(dāng)白細(xì)胞總數(shù)減少時(shí)機(jī)體對病原體的免疫和抵抗能力也會(huì)降低。絞股藍(lán)皂苷可以有效的提高機(jī)體白細(xì)胞含量。

（3）吞噬細(xì)胞是機(jī)體吞噬系統(tǒng)的重要組成部分，在非特異性免疫中發(fā)揮重要作用，可以很好的吞噬機(jī)體異物，處理抗原，而絞股藍(lán)中草藥可以增強(qiáng)吞噬細(xì)胞和其吞噬能力促進(jìn)該功能的發(fā)揮，不僅能非特異性的吞噬侵入機(jī)體的病原體和異物，還能將病原體呈現(xiàn)給T、B淋巴細(xì)胞，進(jìn)而參與到機(jī)體的特異、非特異性的免疫系統(tǒng)。使用絞股藍(lán)皂苷組大鼠的吞噬細(xì)胞指數(shù)和百分率明顯提高，說明絞股藍(lán)皂苷可以很好的增強(qiáng)機(jī)體吞噬功能，提高機(jī)體免疫力。

（4）細(xì)胞免疫是T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的重要機(jī)體免疫反應(yīng)，可以抵抗細(xì)胞內(nèi)微生物感染，并促進(jìn)破壞或溶解感染微生物細(xì)胞的產(chǎn)生和效用發(fā)揮。T淋巴細(xì)胞是介導(dǎo)組織免疫的重要細(xì)胞，來源于骨髓造血干細(xì)胞，主要分布于淋巴結(jié)、脾臟等外周免疫器官和血液，并依賴胸腺完成分化和成熟，可以很好的反應(yīng)機(jī)體細(xì)胞免疫狀況。而絞股藍(lán)皂苷可以有效地增加T淋巴細(xì)胞數(shù)量，并對其免疫功能的發(fā)揮起到很好的促進(jìn)作用。

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